LAPORAN PRAKTIKUM PENAPISAN FITOKIMIA | Fitokimia

PENAPISAN FITOKIMIA GOLONGAN ALKALOID, FLAVONOID, SAPONIN, QUINON, TRITERPENOID, MINYAK ATSIRI DAN KUMARIN

BAB I

PENDAHULUAN

1.1  Tujuan Percobaan

·         Melakukan uji identifikasi pendahuluan terhadap kandungan metabolit sekunder yang terdapat dalam simplisia tumbuhan.

·         Dapat mengenal golongan senyawa-senyawa metabolit sekunder yang biasa terdapat dalam tumbuhan

1.2  Dasar Teori

Penapisan fitokimia dilakukan sebagai pemeriksaan kimia pendahuluan dari simplisia sebelum dilakukan tahap isolasi lebih lanjut. Pemeriksaan terhadap kandungan kimia yang terdapat dalam tumbuhan tergantung kepada sensitivitas dari prosuder analisis dan banyaknya kandungan kimia senyawa yang diidentifikasi.

Tahap-tahap kerja pada analisa fitokimia dari simplisia tumbuhan dapat dilalui dengan tahapan berikut ini,

1. Penyiapan simplisia
1. Panen, pengumpulan organ tumbuhan

-          teknik pengumpulan

-          jenis organ tumbuhan

2. Pencucian dan sortasi basah
3. Perajangan, untuk memperkecil ukuran simplisia terutama organ seperti: rhizoma, umbi/tuber, bulbus, dll.
4. Pengeringan dengan cara:

-          pengeringan alamiah

-          pengeringan buatan

5. Sortasi kering
6. Pewadahan dan penyimpanan

2. Ekstraksi 
3. Metode pemisahan/Isolasi
4. Uji kemurnian isolat (kristal)
5. Identifikasi dan penentuan struktur

Penggolongan komponen kimia dalam tumbuhan, ada beberapa macam antara lain:

A.    Berdasarkan biosintesis

- Metabolit primer

- Metabolit sekunder

B.     Berdasarkan Kepolaran

- Senyawa non polar: steroid, lemak, minyak atsiri

- Senyawa semi polar: kumarin, kuinon, alkaloid

- Senyawa polar: glikosida, saponin, dll.

C.     Berdasarkan sifat asam-basa

- Senyawa basa: alkaloid, amina, dll.

- Senyawa asam: fenol, flavonoid

- Senyawa netral: kumarin, kuinon, dll.

1.2.1       Kumarin

Glikosida yang mengandung kumarin (glikosida lakton) sangat jarang ditemukan.

Senyawa golongan kumarin mempunyai aktivitas biologi yang sangat beragam diantaranya sebagai antikoagulan, estrogenik, fotosensitifitas pada kulit, antimikroba, vasodilator, moluskasidal, antelmintik, antimalaria, antitumor, anti- HIV, antivirus, Ca antagonis, sitostatik, inhibitor 5-lipooksigenase, inhibitor monoamin yang sangat potensial digunakan sebagai obat.

Simplisia yang mengandung kumarin antara lain adalah,

 Kemuning

Tanaman asal                                       : Murraya paniculata(L) Jack

Familia                                                : Rutaceae

Bagian tanaman yang digunakan        : Anak daun dari daun majemuk

Isi tanaman                                          : minyak atsiri, damar, tanin, glikosida muayin, meransinhidrat murangatin, muralongin.

Penggunaan                                         : Anti tiroid, kelebihan lemak

Data penelitian                                    : kemuning mengandung alkaloid murayina yang berupa derivat karbazol, mungkin berasal dari asam antranilat, dalam buahnya mengandung senyawa kumarin: kumarayin, dan daunnya mengandung febalosin.

 Pulasari

Tanaman Asal                                     : Alyxia reinwardtii

Familia                                                : Apocynaceae

Bagian tanaman yang digunakan        : kulit batang dan kulit cabang

Isi tanaman                                          : kumarin, minyak atsiri, asam organik

Penggunaan                                         : demam, sariawan mulut, disentri, pewangi, karminativ, dan spasmolitik.

1.2.2 Triterpenoid Dan Steroid

ü  Triterpenoid

Triterpenoid adalah senyawa yang kerangka karbonnya berasal dari 6 satuan isopren dan secara biosintesis diturunkan dari hidrokarbon C30 asilik, yaitu skualen. Senyawa ini berstruktur siklik yang nisbi rumit, kebanyakan berupa alkohol, aldehida, atau asam karboksilat. Mereka berupa senyawa tanwarna, berbentuk kristal, sering kali bertitik leleh tinggi dan aktif optik , yang umumnya sukar dicirikan karena tak ada kerektifan kimianya. Uji yang banyak digunakan ialah reaksi Lieberman-Burchard (anhidrida asetat + H₂SO₄ pekat) yang dengan kebanyakan triterpena dan sterol memberikan warna hijau-biru.  Tersebar luas dalam damar, gabus dan kutin tumbuhan.

Struktur: - Asiklik : misal : skualen.

               - Siklik   : - mono

                                - bi

                                - tri

                                - tetra

                                - penta

Triterpenoid yang paling penting dan tersebar luas ialah triterpenoid penta siklik.

Struktur kimia triterpenoid terdapat dalam bentuk bebas atau glikosida.

Bentuk bebas  : kepolarannya menengah.

glikosida          : kepolarannya polar.

ü  Steroid

Steroid adalah triterpena yang kerangka dasarnya sistem cincin siklopentana perhidrofenantren dan merupakan senyawa organik  yang  berasal dari hewan dan tumbuhan dengan struktur inti            molekulnya C-17, tetrasiklis dengan susunan 3 cincin segienam dan 1 cincin segi lima. Serupa dengan  triterpen tetrasiklis, tetapi  tidak mempunyai gugus metil pada C-4 dan C-14.

Ciri umum steroid nabati adalah:

1)      Adanya gangguan OH pada C-3

2)      Adanya ikatan rangkap antara C5 dan C6

Klasifikasi:

Didasarkan atas jumlah atom C atau sumber alamnya.

1)     Berdasarkan struktur inti C-17 dengan jumlah atom C substitusi maka steroid dibagi          dalam 5 kelompok sebagai berikut:

         a. Kelompok estrogen (18 atom C) inti estron.

         b. Kelompok androgen (19 atom C) inti androstan.

         c. Kelompok gestogen dan Kortikosteroid (21atom C) inti pregnan.

         d. Kelompok as. Empedu (24 atom C) inti kholan.

         e. Kelompok sterol (27 atom C) inti kholestan.

2)     Berdasarkan sumber alamnya dibagi dalam 4 kelompok:

         a. Zoosterol: berasal dari hewan, terutama yang bertulang belakang.

         b. Fitosterol : berasal dari tumbuhan berklorofil.

c. Mikosterol : berasal dari cendawan.

d. Sterol : berasal dari makhluk hidup laut yang tidak bertulang belakang, misal: spons.

Biosintesis Steroid:

Titik tolak biosintesis steroid adalah Ianosterol (pada hewan) dan siklo artenol (pada tumbuhan), keduanya adalah senyawa triterpen. Ianosterol dan sikloartenol dibiosintesis dari asam asetat melalui pembentukan asam mevalonat dan skualen. Jadi biosintesis adalah melalui jalur asetat-mevalonat.

Identifikasi Steroid:

ü  Reaksi Lieberman buchardat

ü  KLT

         fase diam         : silika gel 60 F254

         fase gerak        : CHCl3 : Etil asetat (2:1)

                     deteksi             :

                     UV 254 nm     : fluorescensi lemah

                     UV 366 nm     : tidak berfluorescensi

                     penampak bercak: anisaldehid sulfat

                                             (panaskan 1050C 2-5 menit)

                                             à ungu s/d biru ungu

Simplisia yang mengandung golongan steroid dan triterpenoid :

 Brotowali

Tanaman asal                                       : Tinospora crispa (L.)

Famili                                                  : Menispermaceae

Bagian tanaman yang digunakan        : Batang

Isi tanaman      : Pati, glikosida pikroretosid, alkaloid, berberin dan palmatin, zat pahit pikroretin, harsa, damar lunak. Akarnya mengandung berberin, dan kolumbin.

Penggunaan     : Antipiretik, sakit perut, sakit kulit, tonikum, sakit kuning, pegal-pegal.

 Jati Belanda

Tanaman asal               : Guazuma ulmifolia Lamk

Famili                          : Sterculiaceae

Isi tanaman                  : Tanin, lendir, damar

Penggunaan                 : Astringen, obat pelangsing, diare, obat batuk

1.2.3 Minyak Atsiri

Minyak atsiri adalah zat berbau atau biasa disebut dengan minyak esential, minyak eteris karena pada suhu kamar mudah menguap di udara terbuka tanpa mengalami penguraian. Istilah esential atau minyak yang berbau wangi dipakai karena minyak atsiri mewakili bau dari tanaman penghasilnya. Dalam keadaan murni dan segar biasanya minyak atsiri umumnya tidak berwarna atau kekuning-kuningan dengan rasa dan bau yang khas. Namun dalam penyimpanan lama minyak atsiri dapat teroksidasi dan membentuk resi serta warnanya berubah menjadi lebih gelap.

Sumber minyak atsiri dapat diperoleh dari setiap bagian tanaman seperti daun, bunga, buah, biji, batang, akar, ataupun rimpang. Selain itu dapat larut baik dalam etanol dan pelarut organik, namun sukar larut dalam air dan kurang larut dalam etanol yang kadarnya kurang dari 70 %. Umumnya zat organik pada minyak atsiri tersusun dari unsur C, H, dan O, berupa senyawa alifatis atau aromatis meliputi kelompok hidrokarbon, ester, eter, aldehid, keton, alkohol dan asam.

Secara kimia minyak atsiri bukan merupakan senyawa tunggal, tetapi tersusun dari berbagai macam komponen yang secara garis besar terdiri dari kelompok terpenoid dan fenil propan. Pengelompokkan tersebut berdasarkan pada awal terjadinya minyak atsiri di dalam tanaman.

Terpenoid berasal dari suatu unit sederhana yang disebut sebagai isoprena. Sehingga dapat dikatakan komponen minyak atsiri termasuk senyawa isoprenoid, karena molekul- molekulnya tersusun dari unit-unit isopren. Sementara fenil propan terdiri dari gabungan inti benzen dan propana. Penyusun minyak atsiri dari kelompok terpenoid dapat berupa monoterpen dan seskuiterpen yang merupakan komponen utama minyak atsiri. Minyak atsiri dapat digunakan sebagai:

1. Menarik serangga (penyerbukan)

2. Untuk kosmetik / parfum

3. Penolak serangga

4. Sebagai bumbu masak

5. Antiseptik (obat)

6. Karminativum

            Sifat- Sifat Minyak Atsiri

Adapun sifat-sifat minyak atsiri adalah sebagai berikut:

1.        Tersusun oleh bermacam-macam komponen senyawa

2.        Bau khas

3.        Rasa getir, tajam, menggigit, memberi kesan hangat sampai panas atau justru dingin bila terasa di kulit

4.        Dalam keadaan murni mudah menguap pada suhu kamar

5.        Tidak bisa disabunkan dengan alkali dan tidak menjadi tengik

6.        Tidak stabil terhadap pengaruh lingkungan, baik oleh oksigen, matahari atau panas

7.        Indeks bias umumnya tinggi dan bersifat optis aktif (memiliki atom C asimetrik)

8.        Kelarutannya sangat kecil di dalam air

9.        Mudah larut dalam pelarut organik

            Keberadaan Minyak Atsiri dalam Tanaman

Minyak atsiri terkandung dalam bernagai organ, seperti di dalam rambut kelenjar, dalam sel-sel parenkim, di dalam saluran minyak, di dalam rongga-rongga skizogen dan lisigen ataupun terkandung dalam semua jaringan.

Minyak atsiri dapat terbentuk langsung oleh protoplasma akibat adanya peruraian lapisan resin dari dinding sel atau hidrolisis dari glikosida tertentu. Peranan utama minyak atsiri pada tumbuhan itu sendiri adalah sebagai pengusir serangga (mencegah bunga dan daun rusak), serta sebagai pengusir hewan pemakan daun lainnya. Namun sebaliknya minyak atsiri juga berfungsi sebagai penarik serangga guna membantu penyerbukan silang dari bunga

            Klasifikasi Minyak Atsiri:

A.      Monoterpen

1.     Monoterpen asiklik :

a.     Hidrokarbon: mirsen, osimen

b.     Aldehid : geranial, neral

c.     Alkohol : geraniol, nerol, linalool

2.     Monoterpen monosiklik :

a.         Hidrokarbon : - d.limonen           - γ-terpinen

                                                       - α-terpinen            - α-felandren

                                                       - β-terpinen           - β-felandren

b.        Aldehid : felandral, peril aldehid

c.         Keton : menton, pulegon, piperiton, karvon

d.        Alkohol : mentol, piperitol, karveol, α-terpineol

e.         Oksida : 1,8-sineol (eugenol), askaridol

3.  Monoterpen Bisiklik

a.         Grup tuyan                                  : α-tuyen, sabinen, tuyon, sabinol

b.        Grup karan                                   : kar-3-en, kar-4-en, karon

c.         Grup pinan                                   : α-pinen,β-pinen, mirtenal, mirtenol

d.        Grup kamfan                               : kamfer, borneol, kamfen

e.         Grup fenkhan                              : fenkhon,α-fenkhen

f.         Monoterpen tidak beraturan        : γ-tuyaplisin, nepetalakton

B.       Seskuiterpen

1.     Seskuiterpen asiklis                    : farnesol, nerolidol

2.     Seskuiterpen monosiklis             : α-bisabolen, γ-bisabolen, zingiberen,

asam absisat

3.     Seskuiterpen bisiklis                   : α-kadinen, β-selinen, azulen

4.     Seskuiterpen trisiklis                  : santonin, aromadendren

Kerangka dasar komponen minyak atsiri adalah terpen yang terdiri dari satuan isoprena. Satuan isoprena yang berperan aktif secara biosintetik adalah isopentenil pirofosfat, dimetil alil pirofosfat serta senyawa yang terbentuk dari asam asetat lewat jalur biosintesis asam mevalonat. Geranil piropsfat adlah prekursor C₁₀ dari terpen dan berperan penting dalam pembentukan monoterpen siklik serta dibentuk melalui kondensasi dari masing-masing satuan isopentenil.

Prekursor pertama untuk komponen fenil propanoid dalam minyak atsiri adalah asam siamat dan asam p-hidroksi sinamatyang juga dikenal sebagai asam p-kumarat. Dalam tanaman, senyawa ini dibentuk dari asam amino aromatik fenilalanin dan tirosin yang akhirnya disintesis lewat jalur asam sikimat yang dapat dibantu oleh Escherichia coli yang membutuhkan asam amino aromatik untuk pertumbuhannnya. Asam sikimat selanjutnya akan menghasilkan asam korismat yang bisa menghasilkan triptofan lewat jalur asam antranilat dan asam prefenat . asam prefanat mengalami dehidrasi dan dekarboksilasi sehingga menghasilkan asam fenilpiruvat (prekursor fenilalanin), atau justru mengalami dehidrogenasi dab dekarboksilasi menghasilkan asam p-hidroksifenil piruvat (prekursor tirosin).

Metode isolasi minyak atsiri dapat dilakukan dengan beberapa cara yaitu:

1.     Penyulingan (destilasi)

Penyulingan adalah proses pemisahan komponen berdasarkan perbedaan titik didihnya. Prinsip dasar penyulingan adalah cairan dirubah menjadi uap pada titik didihnya, kemudian uap tersebut dikondensasikan lagi ke dalam bentuk cairan dengan proses pendinginan

Penyulingan dapat dilakukan dengan bebagai cara, yaitu :

a. Penyulingan dengan air

b. Penyulingan dengan air dan uap

c. Penyulingan dengan uap

2.     Ekstraksi/ penyarian dengan pelarut organik (mudah menguap) yang sesuai

Prinsipnya adalah melarutkan minyak atsiri yang terdapat dalam simplisia dengan pelarut organik yang mudah menguap yang sesuai. Metode penyarian digunakan untuk minyak-minyak atsiri yang tidak tahan dengan pemanasan. Metode ini banyak digunakan karena rendahnya kadar minyak dalam tanaman, selain itu cara ini dianggap paling efektif karena sifat minyak atsiri yang larut sempurna di dalam bahan pelarut organik nonpolar.

3.     Enflurage

Prinsipnya adalah metode perlekatan bau dengan menggunakan media lilin dan memanfaatkan aktivitas enzim yang diyakini masih aktif selama sekitar 15 hari sejak bahan minyak atsiri dipanen. Metode ini digunakan karena ada beberapa jenis bunga yang setelah dipetik enzimnya masih menunjukkan kegiatan dalam menghasilkan minyak atsiri sampai beberapa minggu, misalnya bunga melati. Diperlukan perlakuan khusus secara langsung agar tidak mengubah aktivitas enzim.

4.     Penyarian dengan lemak padat

Biasanya untuk memperoleh minyak atsiri dari bunga-bungaan

a.     tanpa pemanasan (enfleurage)

b.     dengan lemak panas (maserasi)

5.     Pemerasan

Umumnya dilakukan terhadap bahan berupa buah atau kulit buah dari tanaman yang termasuk keluarga Citrus karena minyak atsirinya rusak oleh penyulingan (tidak stabil dan idak tahan pemanasan). Karena tekanan pada pemerasan, sel-sel yang mengandung minyak lemak pecah dan minyak atsiri keluar dan mengalir ke permukaan. Metode ini hanya cocok untuk minyak atsiri yang rendamannya relatif besar.

6.     Penyarian dengan gas CO₂

Metode berdasarkan pada kelarutan minyak atsiri yangbaik dalam CO₂.

           Cara Pengujian

Kimia :

a.     2 mg serbuk simplisia ditambah 5 tetes asam sulfat pekat → coklat hitam

b.     2 mg serbuk simplisia ditambah 5 tetes asam encer → kuning

c.     2 mg serbuk simplisia ditambah 5 tetes larutan NaOH 5 % → coklat tua

d.    2 mg serbuk simplisia ditambah 5 tetes kalium iodida 6 % → kuning

           Pengujian Mutu

Setiap minyak atsiri mempunyai sifat khas dari senyawa kimia yang menyusunnya. Sifat ini dapat berubah karena proses pengolahan dan penyimpanan → perlu dilakukan.

Pengujian mutu yang dilakukan adalah :

1.     Uji organoleptik

2.     Uji sifat fisika dan kimia

                - warna, kejernihan dan bau                        - persentase alkohol

                - bobot jenis                                                - kadar aldehid dan keton

                - putaran optik                                             - kadar fenol

                - indek bias                                                  - kadar sineol

                - bil. Asam                                                   - logam berat

                - bil. Ester dan bil. Penyabunan

           Penentuan Minyak Atsiri

a. KLT

b. KGC

c. SM

           Pereaksi Warna / Penampak bercak :

-    Anisaldehid – H₂SO₄

-    Vanilin – H₂SO₄

-    H₂SO₄ pekat

-    SbCl3 dalam CHCl₃

-    Larutan KMnO₄ 0,2 % dalam air

           Tanaman Penghasil Minyak Atsiri

a.     Minyak kapulaga

b.     Minyak kenanga

c.     Minyak kayu manis

d.    Minyak ketumbar

e.     Minyak sereh

f.      Minyak melati

g.     Minyak lavender

h.     Minyak pala

i.       Minyak lada

j.       Minyak mawar

k.     Minyak nilam

l.       Minyak cendana

m.   Minyak akar wangi

n.     Minyak jahe

Contoh simplisia yang mengandung minyak atsiri:

 Minyak Jahe/ Ginger Oil

Tanaman asal               : Zingiber officinale

Famili                          : Zingiberaceae

Rendeman                   : 3,5 %

Sumber                        : rimpang

Komponen Penyusun  : oleoresin, zingiberena, zingiberol, zingerol, zingerona,       kamfena, felandren, sineol, geraniol, borneol, linalool

Kegunaan                    : bahan pewangi permen, parfum, korigen odoris, karminativum

 Lengkuas

Tanaman asal                                       : Languas Galanga (L.)

Famili                                                  : Zingiberaceae

Bagian tanaman yang digunakan        : Rimpang

Kandungan tanaman                           : minyak atsiri lebih kurang 1% mengandung kamfer, sineol, dan asam metilsinamat.

Penggunaan                                         : Karminatif, antifungi, sakit perut, malaria.

1.2.4        Tanin

Tanin merupakan suatu senyawa golongan yang terbesar dari senyawa kompleks yang tersebar luas pada dunia tumbuhan. Tanin dianggap senyawa kompleks yang dibentuk dari campuran polifenol yang sangat sukar dipisahkan karena tidak dapat dikristalkan. Tanin umumnya terdapat dalam organ: daun, buah, kulit batang, dan kayu. Didalam tumbuhan letak tanin terpisah dari protein dan enzim sitoplasma, tetapi bila jaringan rusak, misalnya bila hewan memakannya maka reaksi penyamakan dapat terjadi. Reaksi ini menyebabkan protein lebih sukar dicapai oleh cairan pencernaan hewan.

Fungsi tanin dalam tumbuhan adalah untuk menghalau hewan pemakan tumbuhan karena berasa sepat.

Secara kimia tanin dapat dibedakan dalam 2 jenis:

ü  Tanin terkondensasi, hampir terdapat didalam paku-pakuan dan Gymnospermae, serta tersebar luas dalam angiospermae, terutama pada jenis tumbuhan berkayu. Merupakan senyawa inti fenol dengan karbohidrat atau protein. Contohnya: proantosianidin (flavolan).

Tanin terkondensasi secara biosintetis dapat dianggap terbentuk dengan cara kondensasi katekin tunggal yang membentuk senyawa dimer dan kemudian oligodimer yang lebih tinggi. Nama lain untuk tanin terkondensasi ialah proantosianidin karena bila direaksikan dengan asam panas, beberapa ikatan karbon-karbon penghubung satuan terputus dan dibebaskanlah monomer antosianidin. Kebanyakan proantosianidin adalah prosianidin, ini berarti bila direaksikan dengan asam akan menghasilkan sianidin.

Proantosianidin dapat dideteksi langsung dalam jaringan tumbuhan hijau dengan mencelupkan kedalam HCl 2M mendidih selama setengah jam. Bila terbentuk warna merah yang dapat diekstraksi dengan amil atau butil alkohol, maka ini merupakan bukti adanya senyawa tersebut.

ü  Tanin terhidrolisis/dapat dihidrolisis, penyebarannya terbatas pada tumbuhan Dicotyledonae. Contohnya: Galotanin dan Elagitanin. Yang merupakan senyawa ester dari asam galat (polihidrat) dengan glukosa.

Simplisia yang mengandung Tanin

 Catechu (gambir, Pale catechu)

Adalah sari air kering yang diperoleh dari daun yang diperoleh dari daun dan ranting muda.

Tanaman asal               : Uncaria gambier (Hunter) Roxb

Familia                        : Rubiaceae

Pemerian                     : tidak berbau, rasa mula-mula pahit dan sangat sepat, kemudian agak manis.

Tempat tumbuh           : Indonesia dan Malaysia

Pemakaian                   : Astringen kuat

Kandungan                 : d-katekhin 7-33% dan Asam Katekutanat 22-50%

 Jambu Biji

Tanaman Asal                         : Psidium Guajava L

Familia                                    : Myrtaceae

Bagian yang digunakan          : Daun

Isi tanaman                              : Tanin 9-12%, minyak atsiri, minyak, lemak, asam malat.

Penggunaan                             : Antidiare, astringens, sariawan, menghentikan perdarahan.

 Delima

Tanaman asal                           : Punica granatum L.

Familia                                    : Punicaceae

Bagian yang digunakan          : kulit buah

Isi tanaman                              : tanin 22-25%, alkaloid cair terutama peleterina dan isopeleterina, kalsium oksalat, pati

Penggunaan                            : buah; obat cacing, disentri, astringen

                                                  Bunga; radang selaput lendir gusi

1.2.5        Saponin

Pembentukan busa yang mantap sewaktu mengekstraksi tumbuhan atau waktu memekatkan ekstrak tumbuhan merupakan bukti akan adanya saponin. Bila didalam tumbuhan terdapat banyak saponin, sukar untuk memekatkan ekstrak alkohol-air dengan baik, walaupun dengan menggunakan penguap putar. Yang paling sederhana untuk membuktikan adanya unsur saponin dalam simplisia adalah dengan cara mengocok nya, dan perhatikan apakah akan terbentuk busa tahan lama pada permukaan cairan. Saponin dapat juga diperiksa dalam ekstrak kasar berdasarkan kemampuannya menghemolisis sel darah.

Saponin jauh lebih polar daripada sapogenin karena ikatan glikosidanya, dan lebih mudah dipisahkan dengan KLT pada selulosa.

Saponin memiliki berat molekul tinggi sehingga menjadikan upaya isolasi ntuk mendapatkan saponin yang murni menemui banyak kesulitan. Berdasarkan struktur aglikonnya (sapogeninnya), saponin dapat dibedakan menjadi 2 macam, yaitu tipe steroid dan tipe triterpenoid. Kedua senyawa ini memiliki hubungan glikosidik pada atom C-3 dan memiliki asal usul biogenetika yang sama lewat asam mevalonat dan satuan-satuan isoprenoid.

Kegunaan

Semua saponin mengakibatkan hemolisis. Oleh karena itu, relatif berbahaya bagi semua organisme binatang bila saponin diberikan secara parenteral. Saponin memiliki kegunaan dalam pengobatan, terutama karena sifatnya yang mempengaruhi absorpsi zat aktif secara farmakologi.

 Kumis kucing

 Daun ungu

Tanaman asal                           : Graptophyllum pictum

Familia                                    : Acanthaceae

Bagian yang digunakan          : Daun

Isi tanaman                              : alkaloid, saponin, tanin, lendir

Penggunaan                             : Daun; wasir, diuretik, obat bisul

1.2.6        Kuinon

Kuinon adalah senyawa berwarna dan mempunyai kromofor dasar seperti kromofor pada benzokuinon, yang terdiri atas 2 gugus karbonil yang berkonyugasi  dengan 2 ikatan rangkap karbon – karbon. Untuk tujuan identifikasi, kuinon dapat dipilah menjadi 4 kelompok: benzokuinon, naftokuinon, antrakuinon, dan kuinon isoprenoid. Tiga kelompok pertama biasanya terhidroksilasi dan bersifat senyawa fenol serta mungkin terdapat in vivo dalam bentuk gabungan dengan gula sebagai glkosida atau kuinol tanwarna, kadang-kadang juga bentuk dimer. Dalam hal demikian, diperlukan hidrolisis asam untuk melepaskan kuinon bebas nya. Kuinon isoprenoid  terlibat dalam respirasi sel dan fotosintesis dan dengan demikian kuinon tersebar secara merata dalam tumbuhan.

Warna pigmen kuinon alam beragam, mulai dari kuning pucat sampai ke hampir hitam. Walaupun kuinon tersebar secara luas, namun perannya terhadap warna tumbuhan  sangat kecil. Jadi, pigmen ini sering terdapat dalam kulit, akar, atau jaringan lain, namun warna pigmen kuinon ini tidak mendominasi.

Deteksi pendahuluan kuinon,

Untuk memastikan suatu pigmen termasuk kuinon atau bukan, dapat dilakukan dengan reaksi warna. Reaksi yang khas adalah reduksi bolak-balik yang mengubah kuinon menjadi semyawa tanwarna, kemudian warna kembali lagi bila terjadi oksidasi oleh udara. Reaksi dapat digunakan dengan menggunakan natrium borohidrida dan oksidasi ulang dapat dilakukan dengan mengocok larutan itu diudara. Untuk kebanyakan kuinon, hasil uji reduksi dalam larutan yang agak basa lebih mencolok dan oksidasi ulang di udara lebih cepat. Kuinon menuknjukan geseran batokrom yang kuat dalam basa, tetapi ini bukan ciri khasnya.

1.2.7        Flavonoid

Semua flavonoid, menurut strukturnya, merupakan senyawa induk flavon yang terdapat berupa tepung putih pada tumbuhanPrimula, dan semuanya mempunyai sejumlah sifat yang sama. Saat ini dikenal sekitar 20 jenis flavonoid.

Flavonoid terutama berupa senyawa yang larut dalam air. Mereka dapat diekstraksi dengan alkohol 70% dan tetap ada pada lapisan air setelah ekstrak dikocok dengan eter minyak bumi. Flavonoid berupa senyawa fenol, karena itu warnanya berubah bila di tambah basa atau amoniak, jadi flavonoid mudah dideteksi pada kromatogram atau dalam larutan.

Flavonoid mengandung sistem aromatik yang terkonyugasi dan karena itu menunjukan pita serapan kuat pada spektrum UV dan spektrum tampak. Flavonoid umumnya terdapat dalam tumbuhan, terikat pada gula sebagai glikosida dan aglikon flavonoid.

Flavonoid terdapat dalam semua tumbuhan berpembuluh tetapi beberapa kelas lebih tersebar daripada yang lainnya. Penyebaran flavonoid meliputi,

Golongan Tumbuhan	Flavonoid
Bakteri	Hampir tidak ada sama sekali
Fungi
Ganggang merah
Lumut hati	Sedikit tipe flavonoid, terutama 3-deoksiantosianin, glikoflavon
Equisetum	Flavonoid berstruktur sederhana, 3-deoksiantosian, flavon, flavonol, leukoantosianidin, kalkon dan flavanon.
Lycopodium
Paku-pakuan
Gymnospermae	Kebanyakan flavonoid, biasanya tipe sederhana, biflavonil
Angiospermae	Segala macam flavonoid, biflavonil jarang

Flavonoid terdapat dalam tumbuhan sebagai campuran, jarang sekali dijumpai hanya flavonoid tunggal dalam jaringan tumbuhan. Disamping itu, sering terdapat campuran yang terdiri atas flavonoid yang berbeda kelas. Antosianin berwarna yang terdapat dalam daun bunga hampir selalu disertai oleh flavon dan flavonolol tanwarna.

Flavonoid mempunyai rumus umum, C₆C₃C₆.

Aktivitas biologi flavonoid antara lain,

- anti kanker                : kuersetin, mirisetin

- anti oksidant             : kuersetin, antosianidin, dan prosianidin

- anti inflamasi            : apigenin, taksifolin, luteolin, kuersetin

- anti alergi                  : nobeletin, tangeretin

- anti hipertensi           : prosianidin

- anti virus                   : amentiflavum, skutellarein, kuersetin

Klasifikasi flavonoid umumnya didasarkan atas inti molekul,

*Harbone membagi flavonoid kedalam kelompok

-          Antosianin

-          Proantosianidin

-          Flavonol

-          Flavon

-          Khalkon dan auron

-          Flavanon

-          Glikoflavon

-          Isoflavon

-          Biflavonil

*Berdasarkan warna flavonoid

*Berdasarkan flavonoid major dan flavonoid minor

- flavonoid major        : flavon, flavonol, biflavonil

- flavonoid minor        : khalkon, dihidrokhalkon, auron, flavanon, flavononol dan isoflavon.

Identifikasi flavonoid: reaksi warna,kromatografi,spektrofotometri

Perlu dipisahkan dari senyawa lain à isolasi +.u. klorofil

Flavonoid: polaritas kurang, polaritas sedang, sangat polar

Cara-cara isolasi flavonoid:

   1. Bahan segar

            Bahan dilumatkan + aseton (jika perlu) digestià perkolasi, saring à fitrat + EMT (40-60oC) 2 x vol

            (jika perlu + sedikit air)

            fase air             : glikosid + aglikon polar

            EMT    : lemak, 2.w. lipofil

            antosianin à harus dalam suasana agak asam

2. Bahan kering

            sari metanol – uapkan – kering – residu

            didigesti dengan air panas

            fase air             : glikosid

            residu              : lemak, klorofil, lipid

3. Isolasi untuk reaksi warna

            500 mg bahan                             refluks          10’ saring

            sisa kering 10 ml sediaan cair   10 ml met OH

            Panas à filtrat + 10 ml H2O + 5 ml EMT kocokà memisah

            à lap. air uapkan   t: 40o        sisa + 5 ml etil asetat

                                           p: <<<

            saring à reaksi warna a 1 ml

4. Isolasi menurut MMI (Materia Medika Indonesia)

            500 mg bahan padat  refluks 10’ saring

            sisa kering 10 ml sediaan cair    10 ml met OH

            Panas à filtrat + 10 ml H2O + 5 ml EMT kocok à pisahkan lap. Air/metanol, uapkan t : 40⁰  sisa + 5 ml etil asetat.

Beberapa simplisia yang mengandung flavonoid antara lain:

 Kumis kucing

Tanaman Asal                         : Orthosiphon stamineus

Familia                                    : Labiatae

Bagian yang digunakan          : Daun

Isi tanaman                              : Senyawa K, saponin, orthosipon glikosida, minyak atsiri, dan saponin

Penggunaan                             : diuretik, batu ginjal, encok

 Tempuyung

Tanaman asal                           : Sonchus arvensis

Familia                                    : Asteraceae

Bagian yang digunakan          : Daun

Isi tanaman                              : silika, kalium, flavonoid, inositol

Penggunaan                             : diuretika, antiurolitiasis

1.2.8        Alkaloid

Ø  Kimia dan penyebaran

Alkaloid sekitar 5500 telah diketahui keberadaannya, merupakan golongan zat tumbuhan sekunder yang terbesar. Tidak ada satupun istilah ” alkaloid” yang memuaskan, tetapi pada umumnya alkaloid mencakup senyawa bersifat basa yang mengandung satu atau lebih atom nitrogen, biasanya dalam gabungan, sebagai bagian dari sistem siklik. Alkaloid sering kali beracun bagi manusia dan banyak mempunyai kegiatan fisiologi yang menonjol; jadi digunakan secara luas dalam bidang pengobatan. Alkaloid biasanya tanwarna, sering kali bersifat optis aktif, kebanyakan berbentuk kristal tetapi hanya sedikit yang berupa cairan (misalnya nikotina) pada suhu kamar.

Ø  Definisi

Alkaloid adalah senyawa yang bersifat basa ( dengan adanya atom N ), biasanya mengandung atom N atau lebih, umumnya dalam gabungan sebagai bagian dari system siklik atau heterosiklik.

Ø  Ikatan N dalam molekulnya dapat berupa :

1.      Amin primer                : C₂NH₂

2.      Amin sekunder            : C₂NH

3.      Amin tersier                : C₃N

4.      Amin quarterner          : C₅N

5.      Nitrogen oksida          : C₃N=O

Ø  Alkaloid dalam tumbuhan biasa terdapat sebagai garam dengan saam organic.

Misalnya:  Asam tartarat                 (alkaloid tartrat)

                  Asam sitrat                    (alkaloid  sitrat)

                  Asam asetat                   (alkaloidasetat)
                  Asam mefenamat          (alkaloid mevalonat)

                  Asam kinat                    (alkaloid kinat)

                  Asam malat                   (alkaloid malat)

Ø  Ciri utama dari alkaloid :

1.      Rasa pahit

2.      Bersifat basa lemah

3.      Zat organik mengandung unsur N

Ø  Asam amino yang sering dijumpai pada biosintesis alkaloid :

1.      Senyawa alifatik  : ornitina, lisina

2.      Senyawa aromatic : asam nikotinat, fenil alanin, tirosin, triptopana

Ø  Manfaat senyawa alkaloid bagi tumbuhan :

·         Untuk menghalau pemangsa ( pemakan tumbuhan )

Ø  Penyebaran

·         Alkaloid tidak hanya dihasilkan tumbuhan tingkat tinggi, tapi juga dapat dihasilkan oleh tumbuhan tingkat rendah.

·         Dapat ditemukan pada tumbuhan :

1.      Ascomycetes                     : Claviceps purpurea

2.      Pteridophyta                     : Equisentum arvense

3.      Gymnospermae                 : Ephedra sp

4.      Monocotyledoneae           : Colchicum sp, Veratrum sp

5.      Dicotyledoneae terdapat pada tanaman familia: Apocynaceae, Leguminoceae, Solanaceae, Rubiaceae, Rutaceae dll.

Ø  Penyaringan (ekstraksi) alkaloid :

1.      Menggunakan eter sebagai cairan penyari :

·         Keuntungan :

a)      Eter tidak membentuk emulsi dan pada pengocokkan tidak mempersukar proses pemisahan.

b)      Eter tidak mempunyai titik didih rendah, sehingga sangat ideal untuk penyaringan alkaloid termolabil.

·         Kerugian :

a)      Daya larut kecil bagi senyawa alkaloid tertentu.

b)      Eter dapat dijenuhkan dengan air,        masih dapat tercampur dengan air.

c)      Eter mudah terurai dan ada kemungkinan peledakan pada saat ekstrak / sari diuapkan.

2.      Menggunakan CHCl3 sebagai cairan penyari :

·         Keuntungan :

a)      Memiliki daya larut yang besar untuk melarutkan alkaloid.

b)      Kemungkinan terurai lebih kecil dari eter.

c)      Tidak ada bahaya peledakan pada pemanasan.

·         Kerugian :

a)      Titik didih CHCl3 agak tinggi, sehingga tidak dapat dipakai sebagai cairan penyari bagi alkaloid termolabil.

b)      Dapat membentuk emulsi pada pengocokkan, sehingga dapat timbul kesulitan pada penyarian dan pemisahan lapisan.

Ø  Penggolongan senyawa alkaloid :

·         Alkaloid sejati :

A.    Tipe C4-N                                   : I. Asal Ornitina

a)      Pirolidina Alkaloid

b)      Tropana Alkaloid

c)      Pirolizidina Alkaloid

B.     Tipe C5-N                                   : II. Asal Lisina

a)      Piperidina Alkaloid

b)      Kinolizina Alkaloid

  III. Asal Asam Nikotinat

a)      Nikotinat Alkaloid

b)      Anabasina Alkaloid

  IV. Asal Tirosina

a)      Benzil-Isokinolina Alkaloid

b)      Isokinolina Alkaloid

  V. Asal Fenilalanin

a)      Amaryllidaceae Alkaloid

  VI. Asal Triptopana

a)      Indol Alkaloid

b)      Kuinolina Alkaloid

c)      Secale Alkaloid

d)     Fisostigmina Alkaloid

e)      Erythrina Alkaloid

·         Proto alkaloid

Berasal dari asam amino tidak heterosiklik

·         Pseudo alkaloid

Prekusor (zat pemula) bukan dari asam amino, terdiri dari :

1.      Steroid Alkaloid

2.      Iridoid Alkaloid

3.      Purina Alkaloid

4.      Imidazol Alkaloid

Ø  Identifikasi alkaloid

1.      Deteksi pendahuluan

Karena secara kimia alkaloid begitu heterogen dan begitu banyak, mereka tidak dapat diidentifikasi dalam ekstrak tumbuhan dengan menggunakan kromatografi tunggal. Pada umumnya, sukar mengidentifikasi suatu alkaloid dari sumber tumbuhan baru tanpa mengetahui kira-kira jenis alkaloid apa yang mungkin ditemukan dalam tumbuhan tersebut.

Di samping itu, karena kelarutan dan sifat lain alkaloid sangat berbeda-beda, cara penjaringan umum untuk alkaloid dalam tumbuhan mungkin tidak akan berhasil mendeteksi senyawa khas.

Sebagai basa, alkaloid biasanya diekstraksi dari tumbuhan dengan pelarut alkohol yang bersifat asam lemah (HCl 1M atau asam asetat 10%), kemudian diendapkan dengan amonia pekat. Pemisahan pendahuluan demikian dari bahan tumbuhan lainnya dapay diulangi, atau pemurnian selanjutnya dilaksanakan dengan ekstraksi pelarut(ekstraksi cair-cair). Adanya alkaloid pada ekstrak nisbi kasar yang demikian dapat diuji dengan menggunakan berbagai pereaksi ”alkaloid”. Tetapi sebaiknya dilakukan KKt dan KLT dalam beberapa pengembang umum yang dapat digunakan, dan kemudian kertas serta pelat disemprot dengan penampak bercak untuk alkaloid.

2.      Langkah kerja

Ekstraksi jaringan kering dengan asam asetat 10% dalam etanol, biarkan sekurang-kurangnya 4 jam. Pekatkan ekstrak sampai seperempat volume asal dan endapkan alkaloid dengan meneteskan NH4OH 1%. Larutkan sisa dalam beberapa tetes etanol atau kloroform.

3.      Pereaksi alkaloid

Untuk pereaksi dragendoff dibuat 2 larutan persediaan: (1) 0,6 g bismutsubnitrat dalam 2 ml HCl pekat dan 10 ml air; (2) 6 g kalium iodida dalam 10 ml air. Larutan persediaan ini dicampur dengan 7 ml HCl pekat dan 15 ml air. Untuk menyemprot kertas dengan pereaksi iodoplatinat, 10 ml larutan platina klorida 5% dicampur dengan 240 ml kalium iodida 2%  dan diencerkan dengan air sampai 500 ml. Untuk menyemprot pelat, campurkan 10 ml platina klorida 5%, 5 ml HCl pekat, dan 240 ml kalium iodida 2%.

Pereaksi marquis hanya dapat digunakan untuk pelat KLT dan terdiri atas`1ml formaldehida dalam 10 ml H2SO4 pekat (bahaya, asam bersifat merusak).

BAB II

PROSEDUR DAN HASIL PRAKTIKUM

2.1 Alat dan Bahan

Bahan :

·       Serbuk simplisia : Kina Cortex, kumis kucing, gambir, brotowali, jahe, kemuning

·       NaOH 1 N

·       NH₄OH pekat

·       NH₄OH 30 %

·       Na asetat

·       Kloroform

·       HCl encer

·       HCl pekat

·       Amilalkohol

·       FeCl₃ 1 %

·       Eter

·       Asam asetat anhidrat

·       H₂SO₄ pekat

·       Etanol

·       Serbuk Mg

·       Pereaksi Meyer

- cara pembuatan reagen : 1,35 gr HgCl₂ dan 5 gr KI dilarutkan dalam 30 ml air, kemudian di ad kan dengan air hingga 100 ml.

·       Pereaksi Dragendorff

-          larutan A : 0,85 gr Bismuth Nitrat basa, larutkan dalam campuran (10 ml asetat dan 40 ml air)

-          larutan B : 8 gr KI dilarutkan dalam 20 ml air

-          Larutan Stock : Volume yang sama dari larutan A dan larutan B disimpan dalam botol gelap.

-          Reagen penyemprot : 1ml dari larutan stock dicampur dengan 2 ml asam asetat dan 10 ml air sebelum digunakan

·       Pereaksi Stiasny (formaldehid 30% : HCl pekat = 2 : 1)

·       Pereaksi Libermann- Burchard (anhidrida asetat + H₂SO₄ pekat)

Alat :

·       Tabung reaksi

·       Kertas saring

·       Penangas air

·       Cawan penguap

·       Kapas corong

·       Pipet

·       Erlenmeyer

·       Gelas kimia

·       Hot plate

·       Gelas ukur

2.2 Prosedur Kerja

1. Identifikasi Golongan Alkaloid

Bahan :

Kina Cortex

Penyiapan filtrat :

1 gr serbuk simplisia ditambah 5 ml NH₄OH 30 %, digerus di dalam mortir, ditambahkan 20 ml kloroform dan digerus kembali dengan kuat, kemudian disaring dengan kertas saring, diperoleh filtrat larutan organik ( larutan A ). Sebagian larutan A diekstraksi dengan 10 ml larutan HCl 1 : 10 di dalam tabung reaksi, larutan bagian atas diambil ( larutan B ).

Pengujian :

ü  Larutan A diteteskan pada kertas saring dan ditetesi dengan pereaksi Dragendorff → merah / jingga pada kertas saring (Å alkaloid )

ü  Larutan B dibagi ke dalam 2 tabung reaksi :

a)     + Dragendorff → ¯ merah bata/ jingga ( Å alkaloid )

b)    + Meyer              → ¯ putih ( Å alkaloid )

2.Identifikasi Golongan Flavonoid

Bahan :

Daun kumis kucing

Penyiapan filtrat :

1 gr serbuk simplisia ditambahkan 50 ml air panas dan didihkan selama 10 menit, didinginkan, disaring dengan kertas saring, diperoleh filtrat.

Pengujian :

5 ml filtrat ditambah serbuk Mg, 1 ml HCl pekat, dan 5 ml amilalkohol kemudian dikocok dengan kuat sampai terbentuk 2 lapisan yaitu lapisan atas berwarna merah yang merupakan lapisan amilalkohol ( Å flavonoid )

3. Identifikasi Golongan Saponin

Bahan :

Daun kumis kucing

Penyiapan filtrat :

Seperti identifikasi golongan flavonoid.

Pengujian :

10 ml filtrat dimasukkan ke dalam tabung reaksi, dikocok vertikal selama 10 detik, didiamkan 10 menit terbentuk busa yang stabil dan bila ditambahkan 1 tetes HCl 1 % busa tetap stabil bedakan dengan sabun ( Å saponin ).

4. Identifikasi Golongan Kuinon

Bahan :

Daun kumis kucing

Penyiapan filtrat :

Seperti identifikasi golongan flavonoid.

Pengujian :

5 ml filtrat dimasukkan kedalam tabung reaksi,ditambahkan 1 tetes NaOH 1 M → merah ( Å kuinon )

5. Identifikasi Golongan Tanin

Bahan :

Gambir

Penyiapan filtrat :

1 gr serbuk simplisia ditambahkan 50 ml air, didihkan selama 15 menit, didinginkan dan disaring dengan kertas saring diperoleh filtrat yang kemudian dibagi ke dalam 2 bagian.

Pengujian :

o   Filtrat I  + FeCl₃ 1 % → biru tua atau hijau kehitaman ( Åtanin )

o   Filtrat II + 15 ml pereaksi Stiasny ( formaldehid 30 % : HCl pekat = 2 : 1 ) dipanaskan di atas penangas air → ¯ merah muda ( Å tanin katekuat )

¯ merah muda disaring, filtrat dijenuhkan dengan Na asetat, ditambahkan beberapa tetes FeCl₃ 1 % → biru tinta ( Åtanin galat ).

6. Identifikasi Golongan Steroid dan Triterpenoid

Bahan :

Batang brotowali

Penyiapan filtrat :

1 gr serbuk simplisia dimaserasi dengan 20 ml eter selama 2 jam, wadah ditutup dengan aluminium foil, dan diikat dengan karet, disaring di dalam lemari asam dan diperoleh filtrat.

Pengujian :

5 ml filtrat diuapkan dalam cawan penguap hingga diperoleh residu, ke dalam residu ditambah 2 tetes asam asetat anhidrat dan 1 tetes H₂SO₄ pekat ( pereaksi Libermann- Burchard ) → hijau, biru kehitaman atau merah ( Å steroid atau triterpenoid ).

7. Identifikasi Golongan Minyak Atsiri

Bahan :

Jahe

Penyiapan filtrat :

1 gr serbuk simplisia dimasukkan ke dalam tabung reaksi ditambah 10 ml eter dan dipasang corong pisah yang diberi lapisan kapas basah pada mulut tabung, dipanaskan selama 10 menit di atas penangas air, didinginkan kemudian disaring dengan kertas saring, diperoleh filtrat.

Pengujian :

Filtrat diuapkan pada cawan penguap, residu dilarutkan dengan 5 ml etanol, disaring dengan kertas saring, filtratnya diuapkan pada cawan penguap residu → berbau aromatik ( Å minyak atsiri ).

8. Identifikasi Golongan Kumarin

Bahan :

Daun kemuning

Penyiapan filtrat :

1 gr simplisia dimasukkan dalam tabung reaksi ditambah 10 ml kloroform dan dipasang corong yang diberi lapisan kapas basah pada mulut tabung, dipanaskan 20 menit diatas penangas, didinginkan dan disaring dengan kertas saring, diperoleh filtrat.

Pengujian :

Filtrat diuapkan pada cawan penguap sampai kering ditambah air panas 10 ml, didinginkan, dimasukkan ke dalam tabung reaksi ditambah 0.5 ml NH₄OH 10 % difluoresensi → biru atau hijau ( Åkumarin )

2.3 Data Hasil Pengamatan

 Identifikasi Golongan Alkaloid

serbuk simplisia + NH₄OH 30 %, digerus di dalam mortir, + kloroform dan digerus kembali dengan kuat, disaring, diperoleh filtrat larutan organik ( larutan A ). Sebagian larutan A diekstraksi dengan 10 ml larutan HCl 1 : 10 di dalam tabung reaksi, larutan bagian atas diambil ( larutan B ).

Pengujian :

ü  Larutan A diteteskan pada kertas saring dan ditetesi dengan pereaksi Dragendorff → merah / jingga pada kertas saring (Å alkaloid )

ü  Larutan B dibagi ke dalam 2 tabung reaksi :

c)     + Dragendorff    →

d)    + Meyer              →

Jadi, kulit kina mengandung alkaloid hanya saja dalam pengujian tidak menunjukan adanya endapan setelah ditambah pereaksi dragendrorff dan meyer kemungkinan terjadi human error.

 Identifikasi Golongan Flavonoid

            5ml filtrat kumis kucing + serbuk Mg + 1ml HCl + 5ml amilalkohol, dikocok, terbentuk 2 lapisan pada lapisan atas yaitu lapisan amilalkohol, terbentuk warna merah.

Jadi, kumis kucing positif mengandung flavonoid.

Identifikasi Golongan Saponin

5ml filtrat kumis kucing, dikocok selama 10 detik               terbentuk busa, dan selama 10 menit busa tetap stabil, + HCl 1% busa tetap stabil.

Jadi, kumis kucing positif mengandung saponin.

Identifikasi golongan tanin

Filtrat gambir + ferri(III) klorida 1% terbentuk warna biru tua. ( Åtanin )

Filtrat gambir + reagen Stiasny dipanaskan terbentuk endapan merah muda. ( Å tanin katekuat )

Endapan disaring, filtrat dijenuhkan dengan Na asetat, + ferri (III) klorida terbentuk warna biru tinta. ( Å tanin galat )

Jadi, Gambir positif mengandung tanin, tanin katekuat dan tanin galat.

Identifikasi Golongan Kuinon

5 ml filtrat kumis kucing + NaOH 1N, tidak terjadi perubahan warna.

Jadi, Kumis kucing tidak mengandung Kuinon.

Identifikasi Golongan Steroid dan Triterpenoid, (data kelompok    )

Filtrat hasil maserasi diuapkan sehingga pelarut menguap dan didapat residu, residu + pereaksi Libermann – Burchard, terbentuk warna hijau.

Identifikasi Golongan Minyak Atsiri

Simplisia + petroleum eter                    saring, filtrat diuapkan, residu dilarutkan dengan alkohol, saring, filtrat diuapkan, residu berbau aromatik.

Jadi, jahe mengandung minyak atsiri.

Identifikasi Golongan Kumarin

Simplisia+ kloroform, panaskan dengan tabung dan penutup kapas dan corong dalam penangas air. Filtrat diuapkan, residu + air panas, dinginkan, larutan dalam tabung reaksi + NH₄OH. Amati dengan sinar lampu ultraviolet.

Karena panjang gelombang sinar UV tidak sesuai maka flouresensi pada filtrat tidak terjadi.

BAB III

PEMBAHASAN DAN KESIMPULAN

3.1 Pembahasan

Pada praktikum kali ini untuk menguji adanya kandungan metabolit sekunder pada beberapa jenis tanaman yang telah diketahui kandungannya, jadi praktikum ini untuk membuktikan adanya kandungan metabolit sekunder itu. Kandungan metabolit sekunder yang dibuktikan pada praktikum kali ini adalah alkaloid, flavonoid, saponin, tanin, kuinon, minyak atsiri, kumarin, steroid dan triterpenoid.

Untuk membuktikan adanya senyawa golongan alkaloid menggunakan serbuk simplisia kina cortex, alkaloid termasuk senyawa yang bersifat basa lemah dapat diekstraksi dengan pelarut seemipolar dalam suasana basa atau dengan alkohol dalam suasana asam. Pada percobaan ini dilakukan dengan metode yang pertama. Yakni serbuk simplisia ditambahkan dengan NH₄OH (basa) hal ini dilakukan untuk mengendapkan alkaloidnya, kemudian ditambahkan pelarut kloroform (semi polar) sehingga didapat senyawa-senyawa yang bersifat semi polar seperti alkaloid, lipid, pigmen, dan senyawa lainnya. Setelah disaring didapat filtrat (larutan A) yang mengandung alkaloid, sebagian ekstrak kental diekstraksi dengan asam encer (HCl) sehingga didapat larutan asam/garam alkaloid (larutan B). Larutan A diuji dengan menggunakan pereaksi Dragendorff pada kertas saring sehingga akan tampak semburat warna merah/jingga.  Dan untuk larutan B ditambahkan pereaksi dragendorff dan pada tabung yang lainnya ditambah dengan pereaksi mayer akan terbentuk endapan. Tetapi dari hasil praktikum setelah ditambah pereaksi tidak menghasilkan endapan yang kemungkinan kesalahan itu timbul dari human error yang terjadi pada saat mengekstraksi dengan asam encer dan kondisi pereaksi yang tidak dibuat baru sehingga mempengaruhi pada hasil ekstraksi.

Untuk senyawa golongan flavonoid dibuktikan pada tanaman kumis kucing (bagian daun). Flavonoid merupakan senyawa yang bersifat asam. Filtrat dari daun kumis kucing tersebut ditambahkan serbuk magnesium dan HCl pekat_. Flavonoid merupakan senyawa fenol yang mudah larut dalam air karena umumnya mereka sering kali berikatan dengan gula sebagai glikosida,  HCl ditambahkan agar kemudian terbentuk aglikon flavonoid (memisahkan flavonoid dari senyawa gula yang mengikatnya). Setelah amilalkohol ditambahkan dan dikocok kuat akan terbentuk 2 lapisan, lapisan amilalkohol berada diatas dan lapisan amilalkohol menjadi berwarna merah menunjukan adanya senyawa flavonoid.

Pada uji saponin yang menggunakan filtrat kumis kucing setelah dilakukan pengocokan kuat pada filtrat akan terbentuk busa, busa ini terjadi karena rantai gula yang terkandung dalam filtrat pecah. Untuk membuktikan busa yang terbentuk merupakan hasil dari adanya rantai gula yang pecah dapat ditambahkan HCl encer, jika saponin maka busa akan tetap stabil.

Pengujian golongan senyawa kuinon yang menggunakan filtrat daun kumis kucing tidak menunjukan perubahan warna merah intensif setelah ditambah NaOH 1N, hal ini terjadi karena memang dalam tanaman kumis kucing tidak mengandung kuinon.

Tanin atau polifenol yang termasuk golongan senyawa fenol dapat diidentifikasi secara khas dengan Ferri (III) klorida akan menunjukan warna biru tua atau hijau kehitaman. Reaksi ini menunjukan adanya tanin dalam filtrat gambir, untuk menguji adanya tanin katekuat dengan menambahkan pereaksi Stiasny kemudian dipanaskan dalam penangas air yang kemudian akan terbentuk endapan merah muda. Untuk tanin galat setelah endapan disaring, filtrat ditambahkan CH₃COONa sampai jenuh, kemudian ditambah FeCl₃ akan terbentuk warna biru tinta.

Minyak atsiri diidentifikasi dari rimpang jahe. Minyak atsiri yang merupakan senyawa non-polar dapat dipisahkan dari komponen lain dengan menggunakan pelarut organik yang bersifat non-polar, seperti petroleum eter yang ditambahkan pada serbuk simplisia dalam tabung reaksi kemudian dipanaskan dalam penangas air dan pada mulut tabung ditutup dengan kapas agar petroleum eter tidak mudah menguap, dan jika ditutup rapat dikhawatirkan akan terjadi bumping. Minyak atsiri yang bersifat non-polar akan tertarik sempurna kedalam pelarut non-polar (petroleum eter). Residu yang didapat dari hasil penyaringan dicuci dengan alkohol, residu yang didapat dari penyaringan berbau aromatik (berbau menyenangkan) menunjukan dalam rimpang jahe mengandung minyak atsiri.

Golongan steroid dan triterpenoid yang bersifat non-polar yang terkandung dalam brotowali diekstraksi dengan cara maserasi dingin, yang merupakan ekstraksi cair-padat antara serbuk simplisia dan pelarut, metode ini digunakan karena dikhawatirkan jika dengan pemanasan akan ada komponen dari simplisia yang rusak. Filtrat yang didapat diuapkan pelarutnya hingga didapat residu, residu ini kemudian diidentifikasi dengan pereaksi Libermann-Burchard dan menunjukan warna hijau atau merah yang menunjukan adanya senyawa golongan steroid dan triterpenoid.

Simplisia ditambahkan pelarut kloroform untuk menarik senyawa kuinon dari simplisia, tabung ketika dipanaskan ditutup dengan kapas agar kloroform tidak mudah menguap, tidak ditutup langsung agar tidak terjadi bumping. Tetapi dari hasil praktikum ini tidak dapat dibuktikan karena sinar  UV yang ada panjang gelombangnya tidak sesuai.

3.2 Kesimpulan

            Metabolit sekunder merupakan suatu senyawa yang penting bagi kehidupan tumbuhan penghasilnya untuk mempertahankan diri dari serangan makhluk lain. Alkaloid, flavonoid, saponin, steroid dan triterpenoid, kuinon, kumarin dan minyak atsiri merupakan beberapa contoh dari metabolit sekunder yang telah diidentifikasi pada praktikum kali ini, ekstraksi senyawa dilakukan dengan beberapa metode dan pelarut organik yang cocok. Kemudian diidentifikasi dengan reagen-reagen yang sesuai yang dapat menunjukan reaksi-reaksi yang khas.

DAFTAR PUSTAKA

 Anonim. 1985. Cara Pembuatan Simplisia. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia.

 Anonim. 1989. Vademekum Bahan Obat Alam. Jakarta: Departemen kesehatan Republik Indonesia.

Gunawan, Didik dan Sri Mulyani. 2004. Ilmu Obat Alam (Farmakognosi) Jilid 1. Jakarta: Penebar Swadaya.

Harbone, J.B. 1987. Metode Fitokimia penuntun cara modern menganalisis tumbuhan terbitan kedua. Bandung: ITB

Redaksi TRUBUS. 2003. Seri Pengalaman Obat Tradisional Sembuhkan Mereka. Jakarta: Trubus.

http://en.wikipedia,org/wiki/biosynthesis

http://en.wikipedia,org/wiki/image:coumarin_acsv.svg

Source : http://chocolate-purplepharmacy.blogspot.com